Thuis ProductenELISA Test Kit

RPT ELISA Kit

RPT ELISA Kit

  • RPT ELISA Kit
  • RPT ELISA Kit
RPT ELISA Kit
Productdetails:
Plaats van herkomst: Shanghai
Merknaam: YAXINBIO
Certificering: NSF ISO 9001:2015
Modelnummer: K03-REK
Betalen & Verzenden Algemene voorwaarden:
Min. bestelaantal: 1
Prijs: 4000 RMB
Betalingscondities: T/T
Contact
Gedetailleerde productomschrijving
Hoog licht:

Varkenstrypsine

,

Serine Proteasetrypsine

  1. Bestemming

Deze ELISA-uitrusting is voorgenomen voor gebruik in het kwantificeren van Trypsine, recombinant van varkensalvleesklier. De uitrusting is slechts voor onderzoekgebruik en is niet voorgenomen voor kenmerkend gebruik in mens of dieren.

 

  1. Principe van de Procedure

Deze Trypsineanalyse is een twee-plaats immunoenzymtric analyse. De recombinante trypsine van varkensdiealvleesklier, in E.Coli, van YAXINBIO, in de steekproeven wordt uitgedrukt wordt in microtiter putten gereageerd met een gezuiverd vangstantilichaam met een laag worden bedekt. Een anti-trypsine monoclonal antilichaam met de peroxidase van de enzymmierikswortel wordt vervoegd (HRP) wordt gereageerd gelijktijdig vormt een sandwich complex van stevige fase antilichaam-trypsine-HRP geëtiketteerd antilichaam dat. Na een wasstap om eender welke unbound reactanten te verwijderen, worden de putten dan gereageerd met tetramethylbenzidine (TMB) substraat. De hoeveelheid gehydroliseerd substraat wordt gelezen op een microtiter plaatlezer en zal direct evenredig aan de concentratie van recombinante trypsine huidig in de steekproeven zijn. De nauwkeurige kwantificatie wordt bereikt door het signaal van recombinante tegelijkertijd geanalyseerde trypsinenormen te vergelijken.

 

  1. Verstrekte reagentia & Materialen
Flesje GLB Etiket Inhoud Opslag
 

Anti-trypsine Met een laag bedekte plaat

Demonteerbare Micro ELISA Plate in een verzegelde zak

8 wells×12-Stroken -20°C
A1 Trypsinenorm (lyophilizates) 4×10 ng 2-8°C

A2

(250×)

HRP Vervoegd anti-Trypsineconcentraat

Muis monoclonal Antilichaam aan recombinante die trypsine met HRP in een eiwitmatrijs met bewaarmiddelen wordt vervoegd

1×0.05 ml -20°C
P1

Verdunnerconcentraat (25×)

Voor Norm, Steekproeven & HRP-Ab

1×5 ml 2-8°C
P2 Wasconcentraat (25×) 1×40 ml 2-8°C
A3 TMB-substraat 3,3 ', 5,5Tetramethylbenzidine 5×0.125 ml

-20°C

Vermijd Licht

P3 TMB-Verdunner (Substraatreagens) 1×15 ml

2-8°C

Vermijd Licht

P4 Eindeoplossing 1×5 ml 2-8°C
  Plaatverzegelaar (Reuseable) 5 bladen  
  Producttussenvoegsel 1  
  Certificaat van Analyse 1  

 

 

 

 

  1. De materialen & de Uitrusting vereisten maar Verstrekt niet
  2. Microtiter de spectrofotometer van de plaatlezer met dubbel golflengtevermogen bij 450 & 650 NM. Als uw plaatlezer geen dubbele golflengteanalyse verstrekt, kunt u bij enkel de 450 NM-golflengte lezen.
  3. Pipettors – 50 μL en 100 μL
  4. Het herhalen of pipet met meerdere kanalen – 100 μL
  5. Incubator, 37°C
  6. Schoon absorberend stootkussen

 

  1. Voorzorgsmaatregelen
  2. Het is niet voorgenomen voor kenmerkend gebruik in mens of dieren.
  3. De eindereagens is 0.5M H2 ZO4. Vermijd contact met ogen, huid en kleding. Bij de concentraties in deze uitrusting worden gebruikt, wordt geen van de andere reagentia die verondersteld schadelijk om te zijn.
  4. Deze uitrusting zou slechts door gekwalificeerde technici moeten worden gebruikt.
  5. Prestatieskenmerken

YAXINBIO heeft de analyse door conventionele criteria zoals hieronder vermeld bevestigd.

  1. Gevoeligheid

De ondergrens van opsporing (LOD) wordt gedefinieerd als die concentratie die aan een signaal twee beantwoorden standaarddeviaties boven het gemiddelde van de nul norm. LOD is ~11 pg/mL in het geadviseerde protocol. De ondergrens van kwantificatie (LOQ) wordt gedefinieerd als laagste concentratie, waar de concentratievariatiecoëfficiënten (CVs) zijn <20>

  1. Precisie

De precisie wordt gedefinieerd als percentenvariatiecoëfficiënt (%CV). Dit wordt berekend door de standaarddeviatie door de gemiddelde waarde voor een aantal omgebogen bepalingen van twee verschillende controlemonsters in de lage en hoge concentratiewaaier van de analyse te verdelen. Zowel intra-analyse als inter-analyse werd de precisie bepaald op 2 pools met lage (~1,25 ng/mL) en hoge concentraties (~10 ng/mL).

Intra-analyse

Aantal Test X (ng/ml) % Cv
20 1.25 6.3
20 10 3.2

Inter-analyse

Aantal Analyses X (ng/ml) % Cv
8 1.25 7.6
8 10 4.6
  1. Specificiteit/Cross-Reactivity
  2. Deze ELISA-uitrusting is bedoeld om Trypsine te ontdekken, recombinant van varkensalvleesklier. Men stelt voor dat de verenigbaarheid van de uitrustingskaliberbepaling wordt geleid, als het voor ander type van trypsine wordt gebruikt.
  3. De volgende materialen werden voor dwarsdiereactiviteit bij de concentraties getest zowel bij gebrek aan recombinante trypsine als in aanwezigheid van de recombinante trypsine van 5 ng/mL worden vermeld. Geen van deze materialen werd gevonden om eender welke statistisch significante valse verhoging te verminderen van duidelijke recombinante trypsineconcentraties op te brengen of. Men adviseert dat elke gebruikerstest bekende materialen in hun steekproefmatrijzen voor dwarsreactiviteit in een gelijkaardig experiment, wanneer het noodzakelijk is.

 

  1. Materialen niet dwars reactief voor recombinante trypsine
Substanties Geteste concentratie
menselijk plasma Onverdund
menselijk serum Onverdund
Pond-middel Onverdund
Recombinante die carboxypeptidase B in E.Coli wordt uitgedrukt 1 mg/ml

 

  1. Beperkingen

De trypsine van andere leveranciers buiten YAXINBIO kan een verschillende reactiviteit met betrekking tot gevoeligheid en nauwkeurigheid tonen. Daarom moet de verenigbaarheid van de uitrustingskaliberbepaling aan het individuele trypsineproduct worden geverifieerd.

  1. Matrijsinterferentie

Hoewel de analyse wordt ontworpen om matrijsinterferentie te minimaliseren, kunnen zich bepaalde steekproefmatrijzen in deze analyse mengen. Materialen, zoals detergentia en zout in hoge concentratie, uitersten van pH (<6>8,5) of zeer hoog - de eiwitconcentraties kunnen onjuiste resultaten geven. Het wordt geadviseerd om de steekproefmatrijs voor interferentie te testen door de 10 ng/mL-norm te verdunnen om de terugwinning te analyseren.

  1. Haakcapaciteit

Het Effect van de hoge Dosishaak kan in steekproeven worden waargenomen

met zeer hoge concentraties van recombinante trypsine. De lezingen van steekproeven groter dan 10 ng/mL (80ng, 100ng, 500ug, 1mg/mL) kunnen absorptievermogens geven minder dan de 40ng/mL-norm. Men adviseert hoogst dat de steekproeven door verdund zouden moeten worden geanalyseerd, toen hun lezingen ≧10 ng/ml waren.

 

 

  1. Kwaliteitscontrole

De precisie op dubbele steekproeven zou gemiddelde variatiecoëfficiënten van 10% voor steekproeven minder dan moeten opbrengen groter dan 1 ng/mL. CVs voor steekproeven <1 ng="">

 

  1. Analysetijd

Incubatietijd: 1 h 45 min aan 2 uren

Totale analysetijd: ongeveer 2 tot 2,5 u

 

  1. Nota's voor steekproeven
  2. De steekproeven zouden binnen 7 dagen moeten worden geanalyseerd, wanneer opgeslagen bij 4°C, of verdeeld en opgeslagen bij -20°C (maand ≤1) of -80°C (maanden ≤3). Vermijd herhaalde freeze-thaw cycli.
  3. Supernatants, van de steekproeven van de celcultuur kunnen wordt gecentrifugeerd voor trypsinebepaling worden gebruikt die.
  4. Het wordt geadviseerd om de steekproefmatrijs voor interferentie te testen, wanneer het noodzakelijk is.
  5. Het wordt geadviseerd om de steekproeven (b.v., 1:20 aan 1:100) met steekproefverdunners te verdunnen, die de trypsineconcentratie van approximately>10 ng/ml in de steekproeven wordt verwacht
  6. Vermijd de analyse van steekproeven die natriumazide bevatten (NaN3), die de HRP-activiteit van de stamverwant zal vernietigen en in lagere lezingen kon resulteren.

 

  1. Procedurenota's
  2. Alle normen, controles en steekproeven zouden in tweevoud moeten worden geanalyseerd. Handhaaf goed een herhaalde timingsopeenvolging van aan goed voor alle analysestappen om te verzekeren dat alle incubatietijden hetzelfde goed voor elk zijn.
  3. Volledig het wassen van de platen om overmaat te verwijderen
  4. unreacted reagentia is essentieel aan goede analysereproduceerbaarheid en gevoeligheid. De hand hieronder beschreven wasprocedure verstrekt lagere achtergronden, over het algemeen hogere specifieke absorbering, en betere precisie. Als dubbele CVs slecht is, of als de absorbering van de 0 ng/mL-norm groter is dan 0,200, evalueer de procedure van de plaatwas voor goede uitvoering.
  5. Als het substraat een verschillende blauwe kleur voorafgaand aan analyse heeft, kan het vervuild te zijn. Als de absorbering van 100 μL van substraat plus 100 μL van eindeoplossing tegen een waterspatie groter is dan 0,1, kan het noodzakelijk zijn om nieuw substraat te verkrijgen of de gevoeligheid van de analyse kan worden gecompromitteerd. De stroken zouden binnen 30 minuten moeten worden gelezen na het toevoegen van eindeoplossing, aangezien de kleur na verloop van tijd langzaam zal verdwijnen.
  6. Meng of gebruik geen componenten van andere partijen (behalve wasbuffer en oplossingen tegenhouden).

 

 

  1. Voorbereiding van Reagentia

Breng alle reagentia aan kamertemperatuur.

  1. Werkende Verdunners voor Norm, Steekproeven & HRP-Ab (P1)

Met gedeioniseerd of gedistilleerd water in een verhouding van 1:25, breng Verdunnersconcentraat (P1, 25×) voor Norm, Steekproeven & HRP-Ab aan werkende Verdunners.

  1. Wasbuffer (P2)

Verdund Wasconcentraat (P2, 25×) met gedeioniseerd of gedistilleerd water in het aandeel van 1:25 om werkende Wasbuffer te maken. Als de kristallen zich in het concentraat hebben gevormd, het in 40°C-water - bad verwarmd en het zacht mengen, tot de kristallen volledig hebben opgelost.

  1. Het werk oplossing voor standaardkromme.
  2. Centrifugeer (1,000×g voor 1 min) kort de trypsinenorm lyophilizates en stelde het zorgvuldig met 1ml opnieuw samen. De definitieve concentratie van de reconstructie is 10 ng/mL.
  3. Het verdubbelen van verdunning
  4. Liquate P1 aan zeven EP-buizen, 500 μL van elk.
  5. Pipet 500 μL van de 10 ng/mL-oplossing voor de eerste buis en de mengeling omhoog om een 5 ng/mL-het werk oplossing te veroorzaken. Pipet 500 oplossing μL van eerstgenoemde buis aan laatstgenoemde in orde, dienovereenkomstig om periodieke concentraties (10,5,2.5, 1,25, 0,63, 0,312, 0,156 en 0 ng/ml) als het werk oplossing voor de standaardkromme te maken. Me ervan bewust ben dat geen oplossing van de vroegere buis aan de laatste buis pipette, aangezien het als lege controle wordt beschouwd.
  6. Het werk oplossing voor Stamverwant antilichaam-HRP (A2)

Verdun de Geconcentreerde HRP-Stamverwant (A2,250×) in een deel van 1:250 met P1. Gebaseerd op het vereiste bedrag (100 μL/well), wordt het extra bedrag van 100~200 μL geadviseerd.

  1. TMB-Substraat (A3)

Verdund TMB-substraat (A3, 20×) met P3 in een verhouding van 1:20 om een het werk oplossing (A3) te maken.

 

  1. Analyseprotocol
  2. Pipet 100 μL van normen, de controles en de steekproeven in de bodem van putten en vermijden ontroerend de binnenmuur en schuimend mogelijk. Dekking microplate met plaatverzegelaar. Dan broed bij 37°C voor 60minuts uit.
  3. Zuig of hevel de oplossing goed van elk op over. Vul grootmoedig putten aan het overlopen met verdunde wasoplossing gebruikend een straalfles of door in~350 μL pipetting. Doorweek 1~2 minuten en zuig of hevel de oplossing op over en tik het.

Droog tegen schoon absorberend document. Herhaal deze wasstap 3 keer.

Nota:

  • Een microplatewasmachine kan in deze stap en andere wasstappen worden gebruikt.
  • Vlek en zacht maar stevig kraan over absorberend document om het grootste deel van de overblijvende vloeistof te verwijderen. Het is niet noodzakelijk in een poging om al overblijvende vloeistof te verwijderen en kan veranderlijke scheiding van antilichaam verbindend materiaal veroorzaken die in lagere ODs en slechtere precisie resulteren.
  • Pipet 100μL van anti rTrypsin-HRP (A2) in elk goed. De dekking & broedt 37°C 30 minuten uit
  • Stortplaatsinhoud van putten. Herhaal voor een totaal van 5 wassen met Wasbuffer (P1). Veeg van om het even welke vloeistof van de bodem buiten de microtiter putten af, aangezien om het even welk residu zich in de lezingsstap kan mengen. Sta geen putten toe om te drogen alvorens substraat toe te voegen.
  • Pipet 100 μL van TMB-substraat (A3).
  • Broed bij kamertemperatuur uit 10-30 minuten. SCHUD NIET.
  • Pipet 50 μL van Eindeoplossing (P4) voor elk goed.
  • Lees absorbering bij 450/650 NM.

 

  1. Berekening van Resultaten
  2. Neem het gemiddelde van de dubbele lezingen voor elke norm en steekproeven, dan trek de gemiddelde nul standaard optische dichtheid af.
  3. De normen kunnen worden gebruikt om een standaarddiekromme met waarden te construeren in ng/mL worden gemeld. Deze gegevensvermindering kan door computermethodes worden uitgevoerd gebruikend kromme-passend routines, zoals 4 parameter logistische geschikte of 5 parameter logistische pasvorm. Gebruik lineaire regressie geen analyse om waarden voor steekproeven te interpoleren aangezien dit tot significante onnauwkeurigheid kan leiden!
  4. De absorbering van steekproeven worden dan geïnterpoleerd van de standaardkromme. Als de steekproeven zijn verdund, moet de concentratie vanaf de standaardkromme wordt berekend met de verdunningsfactor worden vermenigvuldigd die. Als OD van de steekproef de bovengrens van de standaardkromme overtreft, zou u het, na aangewezen verdunning moeten opnieuw testen.
  5. De typische gegevens aangezien de OD waarden van de standaardkromme kunnen variëren, volgens de voorwaarden van daadwerkelijke analyseprestaties (b.v. exploitant, die techniek pipetting, wassend techniek of temperatuurgevolgen) zouden, de exploitant standaardkromme voor elke test moeten bepalen.
  6. De typische standaardkromme en het gegeven worden hieronder verstrekt voor slechts verwijzing.

Experimentele Gegevens

X-Contentes (ng/mL) 10 5 2.5 1.25 0,625 0,312 0,156 0
Y-OD450/650 NM 1,601 1,454 1,231 0,872 0,624 0,382 0,244 0,057
Krijg terug (ng/mL) 10,167 4,822 2,628 1,182 0,657 0,306 0,153
Terugwinning (%) 101.7 96.4 105.1 94.6 105.1 98.1 98.1

Contactgegevens
Shanghai Yaxin Biotechnology Co.,Ltd.

Contactpersoon: Miss Eland

Tel.: +8613482039151

Direct Stuur uw aanvraag naar ons (0 / 3000)

Andere Producten