Activiteitenanalyse van trypsineoplossing en de remming van aprotinin

Doelstelling:

1. Bepaal activiteit van trypsine-EDTA oplossing voor celcultuur van Sigma.

2. Bepaal de bedragverhouding van recombinante aprotinin aan trypsineactiviteit.

Materialen:

1) Trypsine-EDTA oplossing, sigmat4049-100ml Partij   # Augustus van SLBN6048V   EXP 17, 0.25%, steriele gefiltreerd, BioReagent, geschikt voor celcultuur, de varkenstrypsine van 2.5g en 0.2g-EDTA per liter

De Evenwichtige Zoute Oplossing van de streng met fenolrood.

2) RTI (recombinante aprotinin) Partij # 160301, 5,8 EPU/mg, 21.9mg/ml, de Biotechnologieco. Ltd van Shanghai Yaxin.

3) Het substraat van de activiteitenanalyse: BAEE-de oplossing, het voorbereiden van oplossing volgens bedrijf SOPT.

4) De analyse van de trypsineactiviteit: gebaseerd op YaxinBio SOP.

Methode en Resultaten:

1) Bepaal activiteit van trypsine-EDTA oplossing: 4150 BAEE unit/ml.

2) 1EPU RTI kan de 16200 BAEE activiteit van de eenheidstrypsine remmen.

Rem volledig 4150 BAEE-eenheid/ml-trypsine en de gebruikshoeveelheid RTI is 4150/16200 = EBU 0,256.

Het gedetailleerde experiment is zoals volgen:

2.1 neem 150ul-trypsine-EDTA oplossing, is de trypsineactiviteit 622,5 BAEE-eenheid (4150 BAEE-eenheid/ml * 0,15).

2.2 het RTI volume wordt berekend zoals volgen: 622.5/16200 is = 0,0384 EBU, 0,0384/(5,8 * 21,9) = 0.302ul, en dan RTI verdund voor 10 keer, nemend ul 3,02 aan gebruik.

Na 5min-reactie, werd de trypsineactiviteit gemeten.

Resultaat: geen gemeten activiteit, trypsine was volledig geremd.

2.3 bepaal het RTI remmingstarief als in half bedrag toevoeg, 1,51 µl (die de helft van 3.02µl zijn). Andere verrichting is hetzelfde als 2,2.

Na 5min-reactie, werd de trypsineactiviteit gemeten.

Trypsineactiviteit: 2100BAEE eenheid/ml.

Resultaat: Het remmingstarief is 49,39%.

Conclusie:

1) 1EPU RTI remt 16200 BAEE volledig de activiteit van de eenheidstrypsine, als niet volledig geremd, het remmingstarief evenredig aan de hoeveelheid RTI.

2) Bevestig het RTI bedrag overeenkomstig de trypsineactiviteit.

3) De trypsine-EDTA oplossing, sigmat4049-100ml Partij # SLBN6048V, de activiteit is 4150 BAEE/ml,

Als volledig geremd, werd EBU 0,256 aprotinin toegevoegd per ml.

Als halve hoeveelheid aprotinin toevoeg, was de halve trypsineactiviteit geremd.